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实验室主持人：欧阳品主任 连络人：胡智伟 3171, 5008 |
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服务项目： A.原核显微注射（Pronuclei
microinjection） B.胚胎干细胞之基因标的（ES
cell gene targeting） D. 胚胎冷冻（Embryo cryopreservation） E.谘询以下事项： 1. 载体之构筑（Gene
vector construction） 2. 转殖基因载体构筑及制备（Preparation
of constructs） 3. 基因转殖小鼠及基因标的小鼠之饲育及繁殖（Maintenance
of transgenic/ gene-targeted mouse lines） 4.
基因转殖小鼠及基因标的ES
cell 鉴别（Identification of
transgenic founder mice and correctly targeted ES clones） 不提供以下服务项目 A.载体及转殖基因之提供及其制备 B.基因转殖小鼠之鉴别 C.基因标的ES
cell之鉴别 D.基因转殖小鼠及基因标的小鼠品系之代养及繁殖 E.个案结束后之小鼠胚胎保存 使用规则 A. 基因转殖鼠核心实验室（Transgenic
Mouse Core Laboratory）以下简称TMCL，将从10/1/2002起接受长庚系统之委托，生产基因转殖及基因标的小鼠及提供其它相关服务。 B. TMCL之收费将由长庚基因转殖鼠使用委员会（Chang Gung Transgenic Mouse Use Committee）讨论决定，并随时视需要由委员会更改之。 C. 委托个案依收件日期先后顺序及数量为个案进行先后之依据；同一申请人提出一个以上之个案申请，若之后有其它申请个案则以穿插方式进行。收到申请表后TMCL人员会与申请人做进一步的确认。若有其它例外事项，需调动进行之顺序时，则由委员会协调后决定。 D. 转殖基因之来源、背景、转殖基因之构筑图谱；以及欲转殖基因之小鼠品系等均应详细填写于申请表上，以利TMCL人员与申请者间之沟通。 E. 为增进TMCL之执行效率，申请人应详读TMCL之申请须知，转殖基因之制备必须符合TMCL之规定。若转殖基因之质与量不符要求，将予退件，个案进行之时程亦将因此延迟。若屡次不符则取消委托。 F. TMCL只使用健康状况良好及不带有特定病原菌（SPF）之动物，且饲育于长庚实验动物中心无特定病原区内。TMCL不负责个案结束后之动物健康状况。
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原核显微注射（Pronuclei microinjection） A.
事前准备：在申请基因转殖实验前，必须先了解以下事项。 1.已完成转殖基因之构筑。 2.已确立有效筛选转殖基因之方法。（如PCR, Southern blot） 3.有足够的动物房空间可供基因转殖小鼠繁殖。 4.了解基因转殖之特性，例如有些基因受限于其自然特性，无法获得基因转殖小鼠。 B.
小鼠品系：TMCL提供纯品系FVB/N及纯品系C57/B6小鼠为主要对象。其它品系则暂不提供。 C.
已构筑完成之质体必须可以利用常用的限制 D.
为使基因转殖之效率提高，以下几点请遵守： 1.
制备完成之转殖基因质体保存，不可超过两周以上。 2.
构筑完成之质体请勿先行以限制 3.
处理完成之质体必须在10μg以上，体积不超过100μl。送交DNA时必须附上电泳图，清楚标示欲转殖基因之片段。 4.
送交DNA时必须填写实际之浓度，并提供可证明之资料。（如O.D. 及可定DNA浓度之电泳图） 5.
以限制 E.
每一个案将至少提供五只带有转殖基因之小鼠，若同一转殖基因要求更多之基因转殖小鼠应视为另一个新个案。在TMCL正常之操作程序下，若因不可抗力之因素而无基因转殖小鼠或数量不足，TMCL将重做一次，尔后结束此一个案。 F.
进行注射后五个星期，TMCL将通知申请者取回小鼠尾巴。申请人必须在一个星期内回覆并附上筛选结果，领回小鼠。
G.
TMCL不负责基因转殖小鼠后续之代养及繁殖。 H.
所有申请时所需填之表格，均应详细填写。若有填写不清之处，应予补上后才完成申请。在个案进行中需填写之表格，亦需一一详细填写。共有以下表格需填写： N0.1 Pronuclei
microinjection order form－申请时 N0.2
Prescreen confirmation form－申请时 N0.3
DNA material condition form－送交DNA时 N0.4
Tail sample release form－取回尾巴时 N0.5
Animal release form－领回动物时 I.
收费标准 1.
2.
个案开始进行时即行收费。 3. 委员会得视实际情况调整收费。
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胚胎干细胞基因标的（ES cell gene targeting）
A. 事前准备：在申请基因转殖实验前，必须先了解以下事项。
1.
申请前已完成构筑转殖基因。
2.
已确立基因型鉴别方法，包括Long Arm端及Short
Arm端的鉴别。
3.
了解基因标的实验之基本性质。例如有某些基因受其自然限制会将降低此一实验之成功机率。 B.
TMCL使用129/SvJ or R1 品系之ES
cell。因此构筑基因时必须使用同源基因来进行实验。 C.
为维持ES
cell之质量，TMCL将使用以下之规则操作 1.每一次转染（Transfection）TMCL使用至少6×106 ES cell。 2.欲进行实验之DNA必须有100μg以上，体积小于400μl，且在最近两周内制备。以单一限制 3.基因标的实验会因欲处理之基因、构筑基因之设计、选殖基因的选择等等因素影响。使得到正确之ES cell机率有很大的变化（从30-200倍），一般来说单一筛选药物可以获得200-300个以上的细胞株。因此TMCL在每一次实验中会使用一小部分细胞用于对照组（只进行单一筛选）。 D.
在以下情况下TMCL将再进行免费之第二次实验。 1.若第一次实验无成功标的之细胞株。 2.第一次实验所获得之细胞株在100个以下，且没有两个以上成功标的之细胞株。TMCL将使用两倍之细胞数（12×106）来进行第二次实验。 除此之外，若申请者要得到更多的细胞株，将视为另一个新个案。 E.
正确的筛选结果必须在收到ES cell genome DNA后一个月回覆。 H.
所有申请时所需填之表格，均应详细填写。若有填写不清之处，应予补上后才完成申请。在个案进行中需填写之表格，亦需一一详细填写。共有以下表格需填写： No.6 Gene
Targeting order form－申请时 No.2 Prescreen confirmation form－申请时 No.3
DNA material condition form－送交DNA时 No.7
ES cell genome DNA/ES cell release form－取回ES cell 或ES
cell genome DNA(gDNA)时 No.8
Screening result form－回覆结果时 G.收费： 1.
2.个案开始进行时即行收费。 3.委员会得视实际情况调整收费。
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嵌合鼠生产（Chimera production） A. 事前准备：在申请基因转殖实验前，必须先了解以下事项。 1.
申请前已鉴别成功标的之ES cell株。 2.
已找出基因型鉴别方法。 3.
有足够的动物房空间可供嵌合鼠之配种。 4.
了解不是每一只嵌合鼠都可以将标的基因遗传给后代。 5.
申请者有义务告知TMCL其嵌合鼠是否将标的基因遗传至后代。 B.
TMCL使用囊胚显微注射（Blastocyst microinjection）来生产嵌合鼠，TMCL只接受由TMCL所生成之ES cell来进行显微注射。若申请者已将ES
cell领回亦不接受。 C.
TMCL使用C57BL/6之囊胚进行实验。 D.
TMCL以外表之毛皮颜色作为嵌合程度（Chimerism）之依据。TMCL接受的每一个案将至少给申请者六只70 E.
若在第一次注射后发现嵌合程度不高，TMCL将通知申请者做以下两者之一处理。 1.TMCL将进行更多之显微注射以达到六只70 2.进行另外一个细胞株的注射。（不予收费） F.
TMCL不负责嵌合鼠后续之配种，所有嵌合鼠均需在离乳后领回。 G.
所有申请时所需填之表格，均应详细填写。若有填写不清之处，应予补上后才完成申请。在个案进行中需填写之表格，亦需一一详细填写。共有以下表格需填写： No.9 Blastocyst microinjection order form－申请时 No.5 Animal release
form－领回动物时 H.
收费： 1.每一个个案包含两个细胞株注射
2.个案开始进行时即行收费 3.委员会得视实际情况调整收费。
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胚胎冷冻（Cryopreservation） 1. 申请须知： （1） 必须已有十只以上可供配种的公鼠（六周以上）。 （2） 小鼠族群必须无病源菌的污染。 2. 本中心使用超级排卵来获得大量的胚胎以供冷冻，申请者应准备好适当周龄的小鼠以供使用。 3. 本中心一次申� |